Комбіновані методи відновлення шкірного покриву

Одним з найбільш перспективних варіантів відновлення шкірного покриву є комбінований метод. На першому етапі на рану пересідає алогенна шкіра, після її приживлення здійснюють пошарове видалення епідермісу, а на утворилася ранову поверхню пересаджують культуру аутологічних кератит-ноцітов (рис. 7.38).

С. Compton і співавт. (1994) вивчали гістологічні зміни в шкірі, відновленої пересадкою пластів аутологічних кератину-цитов на прижилася алогенну дерму. Встановили, що при такого роду пластику регенерація структур шкіри відбувається швидше. Цей ефект був показаний щодо формування сосоч-кового шару і базальної мембрани (зокрема, що кріплять фібрил). Одночасно за допомогою спеціального барвника, через 2,5 року після пластики, були виявлені еластичні волокна в дермі, що говорило про персистенції алогенної дерми. Рівень приживлення МПК на алогенну дерму був вищим і становив 95%.

Можливі й інші способи моделювання повноцінної дерми. Є. Matouskova і співавт. (1994) культивували КЦ на поверхні безклеточной свинячий дерми і далі пересаджували отримані композиції на рани. На думку авторів композиції такого роду мають ряд переваг перед багатошаровими пластами кератиноцитів. У процесі культивування в клітинах більш інтенсивно йдуть обмінні процеси. Композицію свинячий дерми з клітинами можна трансплантувати на рани без обробки ферментами (діспазой). Композиція має кращі біомеханічні властивості (еластичність, міцність, адгезивність) близькі до таких нормальної шкіри, вона більш зручна у використанні (не зменшується в розмірах після зняття з флакона, її можна розрізати на шматочки). Поліпшення результатів пластики може бути досягнуто і іншими способами. S. Воусе і співавт. (1995) припустили, що аплікація ростових факторів і поживних речовин може підтримувати життєздатність пере-

сажнів на ранові поверхні клітинних композицій до тих пір, поки не завершиться васкуляризація трансплантата. Для цього культивований заступник шкіри, вирощений на субстратного комплексу з колагену і глікозаміногліканів пересаджували на рани безтімусних мишей. Протягом 14 діб трансплантат зрошували кондиційоване ростової середовищем, фізіологічним розчином з EGF, порівняння проводили з сухими пов'язками. Встановили, що такого роду підтримка суттєво покращує виживаність клітин до того моменту, коли завершується васкуляризація трансплантата.

Можливо також використання інших комбінованих варіантів, коли традиційні хірургічні прийоми поєднуються з біотехнологічними методами. Варіантів виконання існує досить багато. Зокрема, трансплантація на ранові поверхні розщепленої алогенної шкіри, має отвори, в які далі переносять аутологічних клітини у вигляді суспензії або пласта [Duingslaeger et al., 1995] (рис. 7.39).

Можливий і зворотний варіант виконання операції, коли в осередку перфорованих клаптів аутологічної шкіри вносять чужорідні кератиноцити. L. Duinsgaluer і співавт. (1994) виконано 70 трансплантацій алогенних клітин в осередку прижилися сітчастих клаптів аутокожі. Аутокожа була проперфорірована у співвідношенні 1:3,1:9 і 1:16. G. Stark і співавт. (1994) трансплантували на рани сітчасті клапті консервованої в гліцерині аллокожі і суспензію клітин (аутологічних) в фібринової клеї. Такий підхід дозволяє скоротити тривалість культивування в 2 рази.

Таким чином, вирощування in vitro клітин шкіри дозволяє вирішити одну з ключових проблем, що виникають при лікуванні постраждалих з критичними і надкритичними опіками, - проблему дефіциту донорських ресурсів шкіри. Разом з тим, існують наступні проблеми. Хірурги, які здійснюють трансплантації, потребують додаткової теоретичної та практичної підготовки. Рани у хворих необхідно більш ретельно готувати до пластики. Слід забезпечити своєчасний відбір біоптатів шкіри у обпалених, їх зберігання та транспортування при режимах, які забезпечують збереження життєздатності клітин. Недоліками методу є технологічна складність, висока вартість і велика тривалість культивування клітин. Крім того, в процесі зняття шару з підкладки за допомогою обробки діспазой може статися загибель клітинної культури.

Дуже перспективним є використання для лікування пластів алогенних кератиноцитів. Пересадка таких клітин на опіки Ша ступеня (після очищення від некротичних тканин) і на донорські ділянки дозволяє більш швидко загоювати рани і відновлювати донорські ресурси шкіри. Прижилися на гранулюючих рани алогенних кератиноцити можуть стимулювати проліферацію епітеліальних клітин зі збережених придатків шкіри. Цілком реальним в даний час є створення клітинних банків. Крім кератиноцитів для лікування обпалених можуть застосовуватися і інші види клітин, зокрема, фібробласти і складні клітинні композиції. Дуже перспективним є вирощування і трансплантація на ранові поверхні клітин шкіри (кератиноцитів і фібробластів) на поверхні мікроносіях, а також плівок. Використання цієї технології дозволяє здійснювати культивування в промислових масштабах. Процедура трансплантації набагато простіша, що дає можливість проводити лікування в стаціонарах будь-якого рівня. Використання культивованих in vitro клітин для відновлення шкірного покриву у важко-обпалених дозволяє істотно підвищити ефективність лікування.